دانلود جزوه | دانلود جزوه
جزوه آزمایشگاه ژنتیک مولکولی دکتر عطاریان در قالب pdf در ۳۷ صفحه بصورت تایپ شده
بخشی از متن فایل
روش غربالگری :
وکتوری داریم به نام RP4 که دارای سه ژن مقاومت آمپی سیلین ، کانامایسین و تتراسایکلین است. مراحل کلونینگ
انجام میشود )محل برش روی ژن آمپی سیلین است(. کلونی هایی تشکیل میشوند که آبی ها دارای پالسمید و زرد ها
بدون پالسمید هستند. در مرحله بعد دو ارلن میگذاریم که یکی محیط کشت ساده است و دیگری دارای تتراسایکلین
است. در محیط کشت ساده تمام باکتری ها ) هم آبی و هم زرد( کلون تشکیل میدهند اما در محیط کشت دیگر فقط
باکتری هایی که ژن مقاومت به تتراسایکلین را دارند رشد میکنند و بقیه حذف میشوند. تفکیک ایجاد میشود و فقط
باکتری های دارای وکتور را در ارلن سمت راست داریم. در مرحله بعد برای اینکه باکتری های دارای وکتور نوترکیب
را از غیر نوترکیب جدا کنیم باید به محیط کشت آمپی سیلین اضافه کنیم. یک کاغذ را روی پلیت سمت راست قرار میدهیم
با این کار همه باکتری ها به کاغذ منتقل میشوند سپس کاغذ را روی محیط کشتی که دارای آمپی سیلین بود میگذاریم و این
باکتری ها به محیط کشت جدید ما منتقل میشوند. در این محیط کشت باکتری هایی میتوانند رشد کنند که ژن آمپی
سیلین آنها دست نخورده و صحیح باشد)غیر نوترکیب ها زنده میمانند(. اگر این دو محیط کشت را کنار
هم قرار دهیم میبینیم که بعضی از کلنی ها در محیط کشت جدید تشکیل نشده و آنهایی که تشکیل
نشده اند حاوی وکتور نوترکیب بوده اند.
در مرحله بعد این کلنی ها را میتوانیم از طریق تکنیک PCR حالت صحیح آن را از حالت نا صحیح آن
جدا کنیم.
اپی زوم ها :
پالسمید هایی هستند که توانایی ادغام در کروموزوم باکتری را دارند و همراه با آن میتواند تکثیر پیدا
کنند.
دو سرنوشت پیدا میکنند :
1-به مرحله ای میرسد که از کروموزوم باکتری جدا میشود.
2-میتواند تا آخر به کروموزوم باکتری باقی بماند.
*وکتور های مختلفی داریم که قطعات متفاوتی از DNA را حمل می کنند.
*باسیلوس ها و استرپتوکوکوس ها توانایی این را دارند که DNA خارجی را دریافت کنند و بعد آن را تکثیر
کنند.
*در سال 1796 مشاهده کردند که وقتی سلول coli.E درون محلولی از آب و نمک و تکه های یخ قرار
میگیرد میزان مستعد بودن و دریافت DNA در آنها افزایش می یابد. به همین دلیل از محلول 50mM،
CaCl2 به صورت سنتی استفاده میشد. همچنین از کلرید ربیدیوم هم استفاده میکردند.